Produktet

Për të përcaktuar në mënyrë specifike sasinë e disa metabolitëve të 5-fluorouracil (5-FU) dhe dy nukleotide monofosfate endogjene, ne zhvilluam një metodë origjinale të bazuar në një spektrometri të masës kromatografi të lëngët-tandem (LC-MS/MS).Kjo analizë lejoi përcaktimin e: (i) prodhimit ndërqelizor të 5-fluoro-2'-deoksiuridin-5'-monofosfatit (5-FdUMP) nga 5-FU ose 5-fluoro-2'-deoksiuridina (5-FdUrd) , (ii) ndikimi i përqendrimit të 5-FdUMP në raportin ndërqelizor 2'-deoksiuridin-5'-monofosfat (dUMP)/timidinë-5'-monofosfat (TMP), dhe (iii) shtrirjen e sekretimit të 5-FdUMP dhe 5-FU nga qelizat e kultivuara njerëzore nga transportuesit ABC.Në kushtet tona eksperimentale, qelizat u inkubuan me 5-FU ose 5-FUrd.Më pas, proteinat qelizore u precipituan nga metanoli.Kjo procedurë siguroi rikuperim të lartë të nxjerrjes.Përveç kësaj, për të matur sekretimin e 5-FU dhe 5-FdUMP nga qelizat, ne kryem kuantifikimin e këtyre molekulave në mjedisin e kulturës.Mediat ose u injektuan drejtpërdrejt (5-FU) ose nën një ekstraktim të fazës së ngurtë duke përdorur fishekun e nxjerrjes Oasis Wax (5-FdUMP).Ndarja e analiteve u krye në një kolonë dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) me modalitet isokratik duke përdorur amonium formati bufer/metanol/ujë (5/5/90, v/v) si fazë lëvizëse.Koha e ekzekutimit nuk i kalonte 6.2 min.Analitet u jonizuan në një ndërfaqe elektrospërkatjeje nën modalitetin e joneve negative.Ne e vërtetuam metodën në një interval prej 2,5-150 ng mL -1 sipas përbërjeve.Ndryshueshmëria brenda dhe ndërmjet analizës ishte më e ulët se 10% gjatë shtatë ditëve.Të gjitha komponimet ishin të qëndrueshme në qeliza ose në mjedisin e kulturës kur mostrat u ruajtën në -20 °C për të paktën dy javë dhe pas tre cikleve ngrirje-shkrirje.Asnjë efekt matricë nuk u vu re në të dy mediat.