Produktet

Proteina ORF45 e herpesvirusit të lidhur me sarkomën Kaposi (KSHV) është një proteinë e menjëhershme e hershme e tegumentit specifike të virusit gamaherpes.Studimet tona të mëparshme kanë zbuluar rolet e tij vendimtare si në fazat e hershme ashtu edhe në ato të vonshme të infeksionit KSHV.Në këtë studim, ne anketuam ndërveprimin e ORF45 duke përdorur një panel antitrupash monoklonal.Përveç proteinave kinase të rregulluara jashtëqelizore (ERK) dhe p90 ribozomale S6 kinazë (RSK) të identifikuara më parë, ne gjetëm disa proteina të tjera të kopurifikuara, duke përfshirë ato të spikatura prej ~38 kDa dhe ~130 kDa.Spektrometria e masës zbuloi se proteina 38-kDa është ORF33 virale dhe proteina 130-kDa është USP7 qelizore (proteaza 7 specifike për ubiquitin).Ne hartuam domenin lidhës ORF33 me aminoacidet 19 karboksil-terminal shumë të konservuar (aa) të ORF45 dhe domenin lidhës USP7 me motivin e konsensusit të raportuar në rajonin qendror të ORF45.Duke përdorur ngjyrosjen me imunofluoreshencë, ne vëzhguam kolokalizimin e ORF45 me ORF33 ose USP7 si në kushte të transfektuara ashtu edhe në qelizat e infektuara me KSHV.Për më tepër, ne vumë re rilokalizimin e varur nga ORF45 i një pjese të ORF33/USP7 nga bërthama në citoplazmë.Ne zbuluam se ORF45 shkaktoi një rritje në akumulimin e proteinës ORF33 që u shfuqizua nëse domeni lidhës ORF33 ose USP7 në ORF45 fshihej.Për më tepër, fshirja e terminalit karboksil të konservuar të ORF45 në gjenomën KSHV uli në mënyrë drastike nivelin e proteinës ORF33 në qelizat e infektuara me KSHV dhe anuloi prodhimin e virioneve të pasardhësve.Së bashku, rezultatet tona jo vetëm që zbulojnë komponentë të rinj të interaktomit ORF45, por gjithashtu demonstrojnë se ndërveprimet midis këtyre proteinave janë thelbësore për replikimin litik të KSHV. Herpesvirusi i lidhur me sarkomën Kaposi (KSHV) është agjenti shkaktar i disa kancereve njerëzore.KSHV ORF45 është një proteinë shumëfunksionale që kërkohet për replikimin litik të KSHV, por mekanizmat e saktë me të cilët ORF45 kryen funksionet e tij kritike janë të paqarta.Studimet tona të mëparshme zbuluan se e gjithë ORF45 pr otein në qeliza ekziston në komplekset me peshë të lartë molekulare.Prandaj, ne kërkuam të karakterizonim ndërveprimin e ORF45 për të siguruar njohuri mbi rolet e tij gjatë replikimit litik.Duke përdorur një panel antitrupash monoklonale, ne anketuam interaktomën ORF45 në qelizat e infektuara me KSHV.Ne identifikuam dy partnerë të rinj lidhës të ORF45: proteinën virale ORF33 dhe proteazën qelizore specifike të ubiquitinit 7 (USP7).Ne demonstrojmë më tej se ndërveprimi midis ORF45 dhe ORF33 është thelbësor për prodhimin efikas të grimcave virale KSHV, duke sugjeruar që ndërhyrja e synuar me këtë ndërveprim mund të përfaqësojë një strategji të re për të penguar replikimin litik të KSHV.