Produktet

Monogalaktopiranozidet e fluoresceinës dhe metil esterit të fluoresceinës: sinteza, hidroliza enzimatike nga β-galaktozidaza e biotniluar dhe përcaktimi i koeficientit të difuzionit translator

Monoglikozidet e fluoresceinës (d-galaktopiranozidi (FMG) dhe d-glukopiranozidi) dhe metil esteri i tyre (MFMG) janë përgatitur nga acetobromoglukoza/galaktoza dhe metil esteri i fluoresceinës me rendimente të mira.Eksperimentet e hidrolizës enzimatike (duke përdorur β-galaktozidazë të biotiniluar) të derivateve të galaktos janë kryer dhe janë llogaritur parametrat kinetikë.Gjatë hidrolizës është vërejtur një rritje 15-20 herë e intensitetit të fluoreshencës.Një rritje lineare e fluoreshencës është vërejtur në një kohë të shkurtër dhe përqendrim i ulët i substratit, duke i bërë këto komponime sonda të dobishme dhe të ndjeshme për galaktozidazat.Madhësia e vlerës së konstantës Michaelis-Menten (Km) për MFMG është më e lartë se ajo e FMG, duke sugjeruar një ndryshim të mundshëm konformues të substratit fluorogjen.Vlera km për β-Gal biotiniluar me FMG është më e ulët se ajo për enzimën vendase.Ky vëzhgim tregon afinitet më të lartë të substratit të enzimës së biotiniluar në krahasim me enzimën vendase.Janë matur koeficientët e difuzionit translator, si për substratet fluorogjene ashtu edhe për produktet, duke përdorur spektroskopinë e korrelacionit fluoreshent.Koeficientët e difuzionit përkthimor për substratet fluorogjene dhe produktet e hidrolizës enzimatike janë matur të jenë të ngjashëm, në intervalin 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Kështu, një rritje ose vonesë e kinetikës enzimatike për shkak të ndryshimit në lëvizshmërinë përkthimore të substratit dhe produktit nuk është aq i dukshëm.