Produktet

Topologjia e membranës së domenit të kanalit të kolicinës E1 u studiua nga transferimi i energjisë me rezonancë fluoreshence (FRET).FRET përfshinte një aminoacid fluoreshent të koduar gjenetikisht (kumarin) si dhurues dhe një mbetje cisteine ​​të etiketuar në mënyrë selektive të lidhur me DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) si pranues FRET.Mbetja fluoreshente e kumarinës u përfshi në proteinë nëpërmjet një çifti ortogonal tRNA/aminoacil-tRNA sintetazë që lejoi përfshirjen selektive në çdo vend brenda domenit të kanalit të kolicinës.Secili variant kishte një mutacion ndalues ​​(TAG) për përfshirjen e kumarinës dhe një mutacion të cisteinës (TGT) për lidhjen DABMI.Gjashtë distanca ndërhelike brenda helikave 1-6 u përcaktuan duke përdorur analizën FRET për gjendjen e tretshme dhe të lidhur me membranë.Të dhënat FRET treguan ndryshime të mëdha në distancat ndërhelike midis helikave 3-6 pas lidhjes së membranës duke ofruar një pasqyrë të re në strukturën e lidhur me membranën e domenit të kanalit.Në përgjithësi, efikasiteti ndërhelikë kumarin-DABMI FRET u ul me lidhjen e membranës, duke u mbështetur në modelin ombrellë për kanalin e kolicinës.Një model tentativë për gjendjen e mbyllur të domenit të kanalit u zhvillua bazuar në të dhënat aktuale dhe të publikuara më parë FRET.Modeli sugjeron rregullimin rrethor të helikave 1-7 në drejtim të akrepave të orës nga ana jashtëqelizore dhe ndërfaqja e ndërfaqes së membranës së helikave 1, 6, 7 dhe 10 rreth fukarit qendror transmembranor të formuar nga spirale 8 dhe 9.