Produktet

Fosforilimi i proteinave rregullon funksione të ndryshme qelizore dhe luan një rol kyç në zhvillimin e hershëm të bimëve.Për të plotësuar dhe zgjeruar hetimet e mëparshme të fosforilimit të proteinave në fidanët e Arabidopsis, ne përdorëm një qasje alternative që kombinon nxjerrjen e proteinave në kushte jo denatyruese me pasurimin me kromatografi të afinitetit të joneve metalike të imobilizuar (IMAC) të fosfoproteinave të paprekura në ekstrakte të varfëruara nga Rubisco, e ndjekur nga identifikimi duke përdorur elektroforezë xhel dydimensionale (2-DE) dhe spektrometrinë masive kromatografi të lëngët-tandem (LC-MS/MS).Tretja me tripsinë në xhel dhe analiza e pikave të zgjedhura të xhelit identifikuan 144 peptide dhe mbetje të fosforiluara, nga të cilat vetëm 18 fosfopeptide dhe 8 fosfozite u gjetën në bazat e të dhënave të faqeve të fosforilimit të PhosPhAt 4.0 dhe P3DB Arabidopsis thaliana.Më shumë se gjysma e 82 fosfoproteinave të identifikuara ishin të përfshira në metabolizmin e karbohidrateve, fotosintezën/frymëmarrjen ose sms mekanizmat e reagimit ndaj stresit oksidativ.Pasurimi i fosfoproteinave të paprekura para 2-DE dhe LC-MS/MS duket se përmirëson zbulimin e mbetjeve të treoninës së fosforiluar dhe tirozinës në krahasim me metodat që përdorin pasurimin në nivel peptid, duke sugjeruar që të dy qasjet janë disi plotësuese për sa i përket mbulimit të vendit të fosforilimit.Krahasimi i rezultateve për fidanët e rinj me ato të marra më parë për gjethet e pjekura të Arabidopsis identifikuan pesë proteina që janë të fosforiluara në mënyrë diferenciale në këto inde, duke demonstruar potencialin e kësaj teknike për hetimin e dinamikës së fosforilimit të proteinave gjatë zhvillimit të bimës.