Produktet

X-gal (i shkurtuar gjithashtu BCIG për 5-bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-galaktopiranozid) është një përbërje organike e përbërë nga galaktozë e lidhur me një indol të zëvendësuar.Komponimi u sintetizua nga Jerome Horwitz dhe bashkëpunëtorët në vitin 1964. Emri formal kimik shpesh shkurtohet në fraza më pak të sakta, por edhe më pak të rënda si galaktozidi bromoklorindoksil.X nga indoksili mund të jetë burimi i X në tkurrjen X-gal.X-gal përdoret shpesh në biologjinë molekulare për të testuar praninë e një enzime, β-galaktozidazë, në vendin e objektivit të saj të zakonshëm, një β-galaktozide.Përdoret gjithashtu për të zbuluar aktivitetin e kësaj enzime në histokimi dhe bakteriologji.X-gal është një nga shumë glikozidet dhe esteret indoksil që prodhojnë komponime blu të patretshme të ngjashme me bojën indigo si rezultat i hidrolizës së katalizuar nga enzimat.

X-gal është një analog i laktozës, dhe për këtë arsye mund të hidrolizohet nga enzima β-galaktozidazë e cila këput lidhjen β-glikozidike në D-laktozë.X-gal, kur ndahet nga β-galaktozidaza, jep galaktozë dhe 5-bromo-4-kloro-3-hidroksiindol - 1. Ky i fundit më pas dimerizohet spontanisht dhe oksidohet në 5,5'-dibromo-4,4'-diklor -lejla - 2, një produkt intensivisht blu i cili është i pazgjidhshëm.Vetë X-gal është pa ngjyrë, kështu që prania e produktit me ngjyrë blu mund të përdoret si test për praninë e β-galaktozidazës aktive.Kjo gjithashtu lejon që β-galaktozidaza bakteriale (i ashtuquajturi lacZ) të përdoret si raportues në aplikime të ndryshme.

Në analizën me dy hibride, β-galaktozidaza mund të përdoret si raportues për të identifikuar proteinat që ndërveprojnë me njëra-tjetrën.Në këtë metodë, bibliotekat e gjenomit mund të kontrollohen për ndërveprimin e proteinave duke përdorur sistemin maja ose bakterial.Aty ku ka një ndërveprim të suksesshëm midis proteinave që ekzaminohen, ai do të rezultojë në lidhjen e një domeni aktivizimi me një promotor.Nëse promotori është i lidhur me një gjen lacZ, prodhimi i β-galaktozidazës, e cila rezulton në formimin e kolonive me pigment blu në prani të X-gal, do të tregojë një ndërveprim të suksesshëm midis proteinave.Kjo teknikë mund të kufizohet në shqyrtimin e bibliotekave me madhësi më të vogël se rreth 106. Ndarja e suksesshme e X-gal gjithashtu krijon një erë të dukshme të keqe për shkak të avullimit të indolit.

Meqenëse X-gal në vetvete është pa ngjyrë, prania e produktit me ngjyrë blu mund të përdoret si test për praninë e një β-galaktozidaze aktive.

Ky identifikim i lehtë i një enzime aktive lejon që gjenit për βgalaktozidazën (gjeni lacZ) të përdoret si gjen raportues në aplikime të ndryshme.