Produktet

Analiza e re e kromatografisë së lëngshme me performancë të lartë për glikoziltransferazat bazuar në derivatizimin me acid antranilik dhe zbulimin e fluoreshencës.

Analizat u zhvilluan duke përdorur kiminë unike të etiketimit të acidit 2-aminobenzoik (2AA; acid antranilik, AA) për matjen e aktiviteteve të të dy galaktosiltransferazës β1-4 (GalT-1) dhe α2-6 sialiltransferazës (ST-6) nga lëngu me performancë të lartë kromatografia (HPLC) me zbulimin e fluoreshencës (Anumula KR. 2006. Avancimet në metodat e derivatizimit të fluoreshencës për analizën e lëngshme kromatografike me performancë të lartë të karbohidrateve glikoproteinike. Anal Biochem. 350:1-23).N-acetilglukozamina (GlcNAc) dhe N-acetillaktozamina u përdorën si pranues dhe uridin difosfat (UDP)-galaktozë dhe citidinë monofosfat (CMP)-N-acetilneuraminik acid (NANA) si donatorë për GalT-1 dhe ST-6, përkatësisht.Produktet enzimatike u etiketuan in situ me AA dhe u ndanë nga substratet në kolonën TSKgel Amide 80 duke përdorur kushte të fazës normale.Njësitë enzimë u përcaktuan nga zonat e pikut duke krahasuar me standardet e derivatuara njëkohësisht Gal-β1-4GlcNAc dhe NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Lineariteti (koha dhe përqendrimi i enzimës), saktësia (intra- dhe ndërvlerësimi) dhe riprodhueshmëria për analizat u vendosën.Analizat u gjetën të dobishme në monitorimin e aktiviteteve të enzimës gjatë izolimit dhe pastrimit.Analizat ishin shumë të ndjeshme dhe të kryera të barabarta ose më të mira se matjet tradicionale me bazë sheqeri radioaktiv.Formati i analizës mund të përdoret gjithashtu për matjen e aktivitetit të transferazave të tjera, me kusht që pranuesit e karbohidrateve të përmbajnë një fund reduktues për etiketim.Një analizë për pranuesit e glikoproteinës u zhvillua duke përdorur IgG.Një metodë e shkurtër e profilizimit të HPLC u zhvillua për ndarjen e glikaneve IgG (G0, G1, G2, mono dhe diialiluar dy herë), e cila lehtësoi përcaktimin e aktiviteteve GalT-1 dhe ST-6 në një mënyrë të shpejtë.Për më tepër, kjo metodë e profilizimit duhet të jetë e dobishme për monitorimin e ndryshimeve në glikanet IgG në mjediset klinike.