Produktet

Ngjashëm me viruset e tjerë të ARN-së me fije pozitive, tombusviruset replikohen nga kompleksi i replikazës virale të lidhur me membranën (VRC).VRC përbëhet nga polimeraza e ARN-së e varur nga ARN e koduar nga virusi p92 (RdRp), ARN-ja virale p33 dhe disa proteina pritëse të kooptuara.Në mënyrë që të bëhet një RdRp funksionale pas përkthimit të saj, proteina e replikimit p92 duhet të inkorporohet në VRC, e ndjekur nga aktivizimi i saj.Ne kemi treguar më parë në një analizë të bazuar në ekstrakt të majave pa qeliza se aktivizimi i virusit të marifeteve me shkurre të domates (TBSV) RdRp kërkon një faktor(a) të tretshëm pritës.Në këtë artikull, ne identifikojmë proteinën qelizore të goditjes së nxehtësisë 70 (Hsp70) si faktorin pritës të zgjedhur të kërkuar për aktivizimin e një TBSV RdRp rekombinante të cunguar në terminale N.Përveç kësaj, bllokimi i funksionit të Hsp70 me bazë molekula të vogla pengon sintezën e ARN-së nga tombusvirus RdRp in vitro.Për më tepër, ne tregojmë se fosfolipidet neutrale, domethënë, fosfatidiletanolamina (PE) dhe fosfatidilkolina (PC), rrisin aktivizimin e RdRp in vitro.Në të kundërt, fosfatidilgliceroli (PG) tregon një efekt të fortë dhe dominues frenues në aktivizimin in vitro të RdRp.Ne demonstrojmë gjithashtu se PE dhe PC stimulojnë ndërveprimin RdRp-viral plus-varge ARN [(+)ARN], ndërsa PG pengon lidhjen e ARN-së virale me RdRp.Bazuar në rolet stimuluese kundrejt roleve frenuese të fosfolipideve të ndryshme në aktivizimin RdRp të virusit tombus, ne propozojmë që përbërja lipidike e membranave nënqelizore të synuara mund të përdoret nga tombusviruset për të rregulluar montimin e ri VRC gjatë rrjedhës së infeksionit. ARN polimeraza e varur nga virusi i koduar (RdRp), i cili është përgjegjës për sintetizimin e pasardhësve të ARN-së virale në qelizat e infektuara të disa viruseve të ARN-së me fije pozitive, fillimisht është joaktive.Kjo strategji ka të ngjarë të shmangë sintezën e ARN-së virale në citosol që do të çonte me shpejtësi në induksionin e përgjigjeve qelizore antivirale të shkaktuara nga ARN.Gjatë montimit të kompleksit të replikazës së lidhur me membranën, RdRp virale aktivizohet përmes një procesi jo të kuptuar plotësisht që e bën RdRp të aftë për sintezën e ARN-së.Duke përdorur TBSV RdRp, ne tregojmë se kaperoni qelizor i kooptuar Hsp70 dhe fosfolipidet neutrale lehtësojnë aktivizimin e RdRp in vitro.Në të kundërt, fosfatidilgliceroli (PG) ka një efekt frenues dominues në aktivizimin in vitro të RdRp dhe ndërveprimin e ARN-së RdRp-virale, duke sugjeruar që mikrodomeni membranoz që rrethon RdRp ndikon shumë në aftësinë e tij për sintezën e ARN-së.Kështu, aktivizimi i RdRp viral ka të ngjarë të varet nga komponentë të shumtë të bujtësit në qelizat e infektuara.