Produktet

Mënyra me të cilën efektet e mutacioneve të njëkohshme kombinohen për të ndryshuar aktivitetin enzimatik nuk është lehtësisht e parashikueshme sepse këto efekte nuk janë gjithmonë shtuese në një mënyrë lineare.Prandaj, karakterizimi i efekteve të mutacioneve të njëkohshme të mbetjeve të aminoacideve që lidhin substratin mund të japë një kontribut të rëndësishëm në kuptimin e specifikës së substratit të enzimave.Në beta-glikozidazën nga Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), të dyja mbetjet Q39 dhe E451 ndërveprojnë me substratin dhe kjo është thelbësore për përcaktimin e specifikës së substratit.Mutantët e dyfishtë të Sfbetagly (A451E39, S451E39 dhe S451N39) u përgatitën me mutagjenezë të drejtuar nga vendi, të shprehura në baktere dhe u pastruan duke përdorur kromatografinë e afinitetit.Këto enzima u karakterizuan duke përdorur p-nitrofenil beta-galaktozid dhe p-nitrofenil beta-fukozid si substrate.Raporti k cat/Km për mutantët e vetëm dhe të dyfishtë të Sfbetagly që përmbajnë mutacione të drejtuara nga vendi në pozicionet Q39 dhe E451 u përdor për të demonstruar se efekti në energjinë e lirë të kamës ESdouble (kompleksi i gjendjes së tranzicionit enzimë) të mutacioneve të dyfishta (Gdouble daggerxy) nuk është shuma e efekteve që rezultojnë nga mutacionet e vetme (Gdouble daggerx dhe Gdouble daggery).Ky ndryshim në kamë Gdouble tregon se efektet e mutacioneve të vetme mbivendosen pjesërisht.Prandaj, ky efekt i zakonshëm llogaritet vetëm një herë në Gdouble daggerxy.Të dhënat kristalografike mbi beta-glikozidazat zbulojnë praninë e një lidhjeje hidrogjenore bidente që përfshin mbetjet Q39 dhe E451 dhe të njëjtin grup hidroksil të substratit.Prandaj, të dhënat termodinamike dhe kristalografike sugjerojnë që mbetjet Q39 dhe E451 ushtrojnë një ndikim të ndërsjellë në ndërveprimet e tyre përkatëse me substratin.